SERVICIO NACIONAL DE
SALUD ANIMAL
DIRECCIÓN GENERAL
AVISOS
Directriz-DG-SENASA-13-2009.—La
Dirección General y la Dirección de Medicamentos Veterinarios,
Considerando:
1º—Que es potestad de la Dirección
de Medicamentos Veterinarios del Servicio Nacional de Salud Animal según lo
establecen la Ley General del Servicio Nacional de Salud Animal (SENASA) Nº
8495 del 6 de abril del 2006 y los Decretos Ejecutivos número 28861-MAG del12 de agosto del 2002; Reglamento de
Registro y Control de Medicamentos Veterinarios y 34319-MAG
del 27 de febrero del 2008, Reglamento de Estructura Organizativa del SENASA,
establecer y poner en ejecución las pruebas de eficacia de ixodicidas
registrados y de nuevo registro.
2º—Que
existen numerosas quejas de usuarios por la poca o ninguna eficacia de los
productos utilizados para el control de garrapata en sus explotaciones.
3º—Que
se ha demostrado científicamente que en Costa Rica existe una marcada
resistencia de la garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus a los productos
organofosforados y piretroides sintéticos; y existen indicios de resistencia a
las amidinas.
4º—Que
es obligación del Estado promover y mantener estándares adecuados en el medio
ambiente y en especial en la salud de la población y que por tanto es necesario
coordinar las acciones en materia de Salud Pública, también, desde el punto de
vista de la salud animal, la cual incide directamente en la salud humana.
5º—Que
igualmente de conformidad con la Ley Nº 8495 antes citada, es obligación
fundamental del Servicio de Salud Animal del Ministerio de Agricultura y
Ganadería, el fomentar la producción pecuaria, proteger el hato nacional y
dictar las medidas requeridas para ello.
6º—Que
dentro de los objetivos y funciones del Servicio Nacional de Sanidad Animal
está el establecer las medidas necesarias relativas al registro, importación,
desalmacenaje, producción, control de calidad, almacenamiento, transporte,
venta y correcta utilización de los medicamentos de uso veterinario.
7º—Que
los ixodicidas son productos químicos que pertenecen al grupo de los
plaguicidas y por sus características de uso y aplicación son objeto de
vigilancia por parte de diversas autoridades, a fin de garantizar al usuario su
calidad y efectividad, dada su naturaleza tóxica, para prevenir los riesgos a
la Salud Pública y los efectos adversos al medio ambiente.
8º—Que
al utilizar productos ineficaces para el control de la garrapata Boophilus
microplus, se induce a un incremento en los costos de producción, debido a los
aumentos en las dosificaciones, aumentos en la frecuencia de aplicación y
debilitamiento de los animales.
9º—Al
aumentar las dosis y frecuencias de aplicación se incrementan los riesgos de
contaminación al ambiente, eliminación de organismos no blanco del producto y
contaminación de aguas superficiales ocasionando daños a la Salud Pública.
10.—Que
los expedientes de registro actuales de estos productos no cuentan con los
estudios de efectividad local contra la garrapata Rhipicephalus (Boophilus)
microplus que es la especie más importante desde el punto de vista de
distribución e impacto económico para los productores nacionales. Por tanto:
EL DIRECTOR GENERAL DEL
SERVICIO NACIONAL DE SALUD ANIMAL
Y EL DIRECTOR DE MEDICAMENTOS VETERINARIOS, RESUELVEN:
1º—Créase la norma oficial
costarricense de efectividad biológica para registro de los ixodicidas de uso
en bovinos y método de prueba, la cual se regirá por el siguiente clausulado y por
la legislación vigente aplicable y que dirá:
NORMA OFICIAL COSTARRICENSE DE EFECTIVIDAD
BIOLÓGICA PARA REGISTRO DE LOS IXODICIDAS
DE USO EN BOVINOS Y MÉTODO DE PRUEBA
ÍNDICE
1. Objetivo y Campo de Aplicación
2. Definiciones
3. Consideraciones Generales
4. Procedimientos para el Inicio de las Pruebas
5. Requisitos de Efectividad Biológica
6. Método de Evaluación Biológica
7. Bibliografía
1. Objetivo y Campo de Aplicación. La
presente Norma es de observancia obligatoria en todo el territorio nacional y
tiene por objeto establecer los métodos de prueba y los parámetros de
efectividad biológica que deben cumplir los productos ixodicidas para uso en
bovinos.
Los ixodicidas de uso en medicina veterinaria, cuya
finalidad sea el control de la garrapata en ganado bovino, que pretendan la
aprobación oficial de comercialización ante Servicio de Salud Animal (SENASA),
serán objeto de esta Norma, independientemente de su presentación, familia
química y formulación.
Los productos mosquicidas de uso pecuario, en cuya
formulación se utiliza un principio activo con efecto garrapaticida, deberán
sujetarse a lo establecido en la presente Norma.
La vigilancia y aplicación de las disposiciones
previstas de esta Norma corresponde al SENASA.
2. Definiciones. Para efectos de esta Norma, se entiende por:
C.I.O.:
Concentración de inhibición de la ovoposición, y es un parámetro utilizado para
estimar el porcentaje de huevos ovipositados en un lote tratado, con respecto
al lote control.
C.I.E.: Concentración
de inhibición de la eclosión, y es un parámetro utilizado para estimar el
porcentaje de emergencia de larvas en un lote tratado, con respecto al lote
control.
Ingrediente activo:
Componente químico que confiere a cualquier compuesto el carácter plaguicida
específico del mismo.
Ixodicida:
Plaguicida destinado a prevenir, controlar o combatir las infestaciones debidas
a las garrapatas.
Ixodicida formulado:
Producto resultante de la combinación del plaguicida técnico con otros
ingredientes, que por sus características físicas, químicas y, en su caso,
biológicas, está listo para su dilución y/o aplicación por el consumidor.
Laboratorio aprobado:
Laboratorio reconocido por la Dirección de Medicamentos Veterinarios del SENASA
para realizar servicios de constatación en materia de medicamentos
veterinarios.
LANASEVE:
Acrónimo de Laboratorio Nacional de Servicios Veterinarios del SENASA
Material biológico:
Organismos y microorganismos vivos que son utilizados para la ejecución de los
ensayos a que se refiere la prueba biológica.
Ministerio:
Ministerio de Agricultura y Ganadería.
Muestreo de bandera:
Metodología utilizada para estimar la densidad poblacional de las fases de vida
libre de los ixodicidas en su hábitat natural.
Norma: La Norma
Oficial Costarricense que establece los Requisitos de efectividad biológica
para los ixodicidas de uso en bovinos y método de prueba.
Plaguicida: Es una
sustancia o compuesto que se destina a prevenir, controlar o combatir cualquier
plaga, incluidos los vectores.
Plaguicida técnico: Es la
máxima concentración del ingrediente activo, obtenida como resultado final de
su fabricación, a partir de la cual se inicia la preparación de una fórmula
plaguicida. Por su estado físico, puede ser sólido, líquido o gaseoso.
Prueba biológica: Examen
o constatación ha la que es sometido un producto químico farmacéutico o
biológico, que mediante un diseño experimental que involucra organismos vivos,
se confirma la eficacia o efectividad del producto para el control de la plaga
o agente causante de la enfermedad.
Prueba de campo:
Modalidad de la prueba biológica realizada bajo condiciones en que se
encuentran naturalmente los animales, que implica una infección natural de los
mismos
Prueba de establo:
Modalidad de la prueba biológica, que es realizada en su totalidad bajo
condiciones controladas, tanto de manejo de los animales, como de exposición al
agente productor de la enfermedad.
Prueba de laboratorio:
Modalidad de la prueba biológica, en que el ensayo es realizado en su totalidad
bajo condiciones de laboratorio.
SENASA:
Servicio Nacional de Salud Animal
3. Consideraciones Generales. Las pruebas
biológicas a las que estarán sujetos los productos a evaluar serán de
laboratorio, establo y si las condiciones lo permiten de campo, para lo cual el
Departamento dictará las medidas específicas para cada evaluación de campo,
siendo obligatorias en todos los casos además de las que dicte, la supervisión
por parte de personal oficial y el cumplimiento de protocolos establecidos de
antemano.
Los plaguicidas aprobados como acaricidas,
mosquicidas y endectocidas de uso pecuario, en cuya formulación se incluya un
ingrediente activo con actividad ixodicida y que no hayan aprobado como tales,
deberán incluir en su etiqueta y publicidad impresa, una leyenda que
especifique: “Este producto no deberá ser utilizado para el tratamiento de
infestaciones por garrapata”.
En el caso de las vacunas contra la garrapata
que no son garrapaticidas químicos, deberán ser evaluadas para su regulación,
debido a que están destinadas al control de garrapatas Boophilus spp. La
evaluación deberá realizarse en establo y campo, para ello el laboratorio de
pruebas preparará un protocolo apegado, en lo general, a la metodología
establecida en el texto de la presente Norma. Dicho protocolo deberá ser
discutido y convenido con el laboratorio que presenta la solicitud de
regulación.
Los elementos básicos que debe contener el
protocolo son:
a) Producto de la evaluación: se deberá lograr al
menos un 80% promedio de control sobre garrapata Boophilus.
b) La aplicación de la vacuna no deberá provocar
lesiones o reacciones secundarias imputables a la vacunación.
4. Procedimiento para el Inicio de las Pruebas.
El laboratorio interesado deberá enviar al laboratorio aprobado lo
siguiente:
a) Una muestra del producto formulado, previamente
valorado y con el certificado analítico de la muestra.
b) Información sobre las características químicas,
fisicoquímicas, de estabilidad, farmacológicas, toxicológicas, de efectividad
biológica; así como la concentración de residuos en tejidos y fluidos de origen
animal en el producto a evaluar.
5. Requisitos de Efectividad Biológica. El
porcentaje de efectividad promedio de todas las pruebas sobre el potencial
reproductivo mínimo que deberá lograr un producto en la evaluación en
garrapatas Boophilus spp., será de 98%; si éste fuera inferior en algún ensayo
de los obligatorios pero no menor a 95%, se considerará en función de los otros
resultados obtenidos en las pruebas.
6. Evaluación Biológica.
6.1. Pruebas de laboratorio.
6.1.1 Inmersión de hembras repletas a la
concentración recomendada. El objetivo de esta prueba es determinar el
porcentaje de control que ofrece un producto a la concentración comercial recomendada
sobre garrapatas hembras repletas Boophilus spp. bajo el siguiente
procedimiento:
a) Selección del material biológico. Se
seleccionan las garrapatas hembras eliminando aquellas demasiado pequeñas o muy
grandes, deformes o con claros signos de estar dañadas. Para cada producto a
evaluar se necesitan lotes de 50 especímenes dividiéndolos en cinco grupos de
10 garrapatas cada uno y otros más como testigos. Las hembras ingurgitadas se
pesan en una balanza analítica y se colocan en cajas petri de 9.0 cm de diámetro
con un papel filtro Whatman Nº 1 en el fondo, cada una de las cajas se
identifica debidamente con los siguientes datos: lote, grupo, cepa, producto
utilizado, concentración y fecha de tratamiento. Los datos de los pesos se
anotan en un formato, el cual contendrá la información adicional arriba
mencionada. Como requisito mínimo se considera necesario desafiar cada producto
con una cepa susceptible de Boophilus microplus, Para el caso de Boophilus, el
porcentaje de efectividad propuesto se basa en experiencias obtenidas en el
Laboratorio Nacional de Servicios Veterinarios (LANASEVE) del SENASA del
Ministerio de Agricultura y Ganadería. Solicitar un porcentaje de efectividad
mayor, sería muy difícil de lograr para los ixodicidas y esto haría en muchos
de los casos que tuviera que elevar sus concentraciones en partes por millón,
lo cual sería de alguna manera riesgoso para la salud de los animales y de los encargados de
aplicar los ixodicidas. Por otro lado, un producto que alcanza el 98%, garantiza
que la descendencia no sobrevivirá y por lo tanto el control es mucho mayor al
reducir drásticamente la población.
b) Preparación de compuestos. Una vez que
han sido pesados los grupos, seleccionados e identificados como testigos y
tratados, se procederá a preparar el ixodicida a evaluar. Para este tipo de
ensayos se requiere un mínimo de 250 ml de solución para tratar a 50
especímenes. La mezcla se afora con agua destilada para llevarla al volumen
final.
c) Tratamiento. En un frasco de vidrio
limpio de boca ancha tipo “Gerber”, se añade una porción de la solución
garrapaticida, en la que se sumergen los especímenes de un grupo durante un
minuto; transcurrido este tiempo, se vacía el contenido en otro recipiente
provisto de un colador, eliminando el excedente sobre un papel secante. Las
garrapatas se alojarán en su caja de petri respectiva y el grupo testigo se
tratará con agua solamente.
d) Incubación. Todas las cajas con las
garrapatas tratadas se colocan en una estufa de incubación a una temperatura de
27°C
y una humedad relativa de 80%; catorce días después del tratamiento, se evalúa
la capacidad del producto de inhibir la ovoposición en las garrapatas tratadas.
Este día se procede a retirar los huevos ovipositados, los cuales se pesan y se
colocan en viales de vidrio que se tapan con una torunda de algodón,
incubándose bajo las mismas condiciones de temperatura y humedad antes
descritas. Los pesos de los huevos se registran en las formas específicas. Para
determinar el efecto sobre la eclosión de los huevos se mantienen en la estufa
durante 25 días; transcurrido ese tiempo, se procede a sacrificar por calor (45°C) las
larvas resultantes tanto de los grupos testigos como los tratados. El contenido
se homogeniza perfectamente y se toman 5 alícuotas para realizar los conteos de
cascarones y huevos en cada uno de ellos; de esta manera se calcula el
porcentaje de eclosión alcanzado en cada grupo y lote.
e) Análisis de resultados. Con los datos
del peso de garrapatas en cada grupo y el peso de la ovoposición, se calcula el
porcentaje de inhibición de ovoposición como sigue, aplicando la siguiente
fórmula:
P Lt - PHLt
%
I.O. = ____________________ x 100
pLT PHLT
Donde:
P Lt =
Peso de hembras del lote tratado.
P LT = peso de
hembras del lote testigo.
PHLt = Peso de huevos del lote tratado.
PHLT = Peso de huevos del lote testigo.
Para determinar el porcentaje de control es
necesario calcular la reproducción estimada por un grupo, mediante la fórmula
propuesta por Drummond, en donde:
peso
de huevos
RE: ______________________________X 20,000 x % de Eclosión
peso de hembras
por grupo
Una vez calculadas las RE de ambos lotes,
tratados y testigos, se procede a calcular el porcentaje de control como sigue:
RET - REt
%C
= _________________ x 100
RET
Donde:
RET= Reproducción estimada en el lote testigo.
REt= Reproducción estimada en el lote tratado.
De esta manera se obtiene el parámetro principal de la
evaluación “in vitro” de ixodicidas a la concentración recomendada para su uso en
los animales, sobre garrapatas hembras repletas.
f) Rango de aceptación. 100% de control
obligatorio.
6.2. Pruebas en vivo.
6.2.1 Prueba de cámaras para evaluación
de productos para tratamiento de aspersión. El objetivo de esta prueba consiste
en la evaluación de un ixodicida al ser aplicado en áreas seleccionadas de un
bovino infestado artificialmente previo al tratamiento, de tal forma que al
momento de administrar el producto sea posible conocer su efectividad sobre los
diversos estadios de desarrollo de las garrapatas. Esta prueba fue adaptada de
la propuesta realizada originalmente por Dowing y cols., con el fin de realizar
ensayos con productos químicos en áreas localizadas de un bovino, en las cuales
se practican infestaciones artificiales periódicamente, previas al tratamiento.
La prueba proporciona información útil acerca de la
efectividad que alcanzan productos ixodicidas cuando son aplicados en bovinos o
sobre tales áreas y en las cuales se encuentran presentes garrapatas en distintos
estadios de desarrollo parásito, incluyendo aquellas en fase de muda. Por otro
lado, la oportunidad de realizar seguimientos “in vitro” de los especímenes
recolectados durante el periodo posterior al tratamiento, complementa y
enriquece los resultados de estas evaluaciones.
a) Selección del material biológico. Se
utilizarán 6 bovinos de razas europeas con un peso de 200-300 kg, los cuales
serán mantenidos durante la ejecución de la prueba en infestaderos especiales
con agua y alimento de alta calidad, proporcionada “ad libitum”.
Garrapatas: La elección se realizará previa
realización de la prueba. Las garrapatas a utilizarse deberán ser del género o
cepa de la misma especie, descrita en el acápite 1.1.a) del punto 6 de esta
Norma.
b) Preparación de los animales. Sobre el
dorso y lomo de los animales, se seleccionarán de 4 a 6 partes que
ofrezcan las mejores condiciones para la prueba, trazándose sobre cada uno un
círculo de aproximadamente 20 cm de diámetro; alrededor de los círculos se
rasura una franja de 4-5
cm de ancho, para facilitar el pegado de las mangas de
tela. Las mangas se confeccionan con tela de punto, la cual proporciona la
elasticidad requerida en su manejo y evita el escape de larvas. Dichas mangas
se adhieren utilizando pegamento de contacto, un día antes de iniciar las
infestaciones, con el fin de favorecer la volatilización de los solventes
presentes en el adhesivo.
c) Sistema de infestaciones. Generalmente
en los trabajos con Boophilus se realizan 10 infestaciones cada tercer día para
cumplir un periodo de 27 días entre la primera y la última infestación. Esto
permite que la mayoría de los especímenes de las primeras infestaciones
completen su fase parásita y puedan ser utilizados como controles para
determinación de efectividad.
En cada infestación se colocan por cámara entre 15 y
20 mg de larvas, que equivalen aproximadamente a 300-400 especímenes, entre 15
y 45 días de eclosionadas.
d) Tratamiento. La aplicación de productos
químicos en los animales o sobre las áreas infestadas se realiza de acuerdo con
las recomendaciones y posología o concentración sugerida por el laboratorio
productor. En caso de ixodicidas convencionales, se utilizan 500 ml de líquido
preparado para cada cámara, retirando la manga de infestación, el cual se aplica
mediante una aspersora de gatillo con la apertura de boquilla que facilite una
buena impregnación del área sujeta a tratamiento. Las áreas seleccionadas como
testigo serán asperjadas solamente con agua, utilizando el mismo volumen
indicado para el producto.
e) Seguimiento. Una vez que los animales o
las áreas han sido tratados, se adhieren nuevas mangas, iniciando así el
periodo de observaciones sobre el efecto de las garrapatas. Diariamente se
realizarán recolectas de todos los especímenes que se desprendan, registrándose
y clasificándolos de acuerdo con sus características y condiciones. Las hembras
repletas y semirepletas que presenten signos vitales serán alojadas en cajas de
petri, colocándose en incubadora bajo condiciones ambientales óptimas, con objeto
de que continúen su ciclo biológico. También es registrado el peso de la
ovoposición y el porcentaje de eclosión alcanzado por estos especímenes.
f) Evaluación de resultados. Los datos
obtenidos en los seguimientos de pre y pos-tratamiento en los grupos testigo y
tratado serán utilizados para realizar comparaciones en los parámetros
biológicos siguientes: - Número de garrapatas producidas.- Efecto sobre la
ovoposición en las garrapatas del grupo tratado, que alcancen repleción pese a
la aplicación del producto químico a evaluar.- Potencial reproductivo obtenido
en base al número de larvas viables que se produzcan en cada grupo de trabajo.
Los parámetros biológicos propuestos se calcularán de acuerdo a las siguientes
ecuaciones:
- Efecto sobre la repleción:
A
x D
% de E = 100 [ 1 -
__________ ]
B
x C
Donde:
A = Número
de garrapatas en el lote testigo pre tratamiento.
B = Número de
garrapatas en el lote testigo pos tratamiento.
C = Número de garrapatas en
el lote tratado pre tratamiento.
D = Número de garrapatas en
el lote tratado pos tratamiento.
- Efecto sobre la ovoposición:
O
/ P T - O / P t
% I.O. = _____________________________
X 100
O
/ P T
Donde:
I.O. = Inhibición de la ovoposición
O / P = Peso de
huevos/peso de garrapatas x 20,000 T = Lote testigo.
t = Lote tratado
- Efecto sobre el potencial reproductivo:
A(XL)
x D (XL)
% E / P.R. = 100 [
1 - __________________ ]
B(XL)
x C (XL)
Donde:
A, B, C, D, son los mismos parámetros para
calcular efectividad.
(XL) = Número promedio de larvas, que se
calcula de la siguiente manera:
(P.O. x 20,000 x F.C. % Ecls.) / Nº O
P.O. = Peso de la ovoposición
F.C. % Ecls. = Fracción centesimal del
porcentaje de eclosión
Nº O = Número de garrapatas hembras repletas
seleccionadas
6.2.2 Prueba de establo con infestación libre.
Esta prueba está diseñada para evaluar el efecto de la aplicación simple de un
producto ixodicida a una concentración o dosis determinada sobre animales
infestados artificialmente de tal forma que, en el momento del tratamiento, se
encuentren presentes en cantidades significativas todos los estadios de
desarrollo de garrapata Boophilus, la cual deberá realizarse bajo el siguiente
procedimiento:
a) Selección del material biológico. Se
utilizarán 6 bovinos de razas europeas con un peso de 200-300 kg, los cuales
serán mantenidos durante la ejecución de la prueba en infestaderos especiales
con agua y alimento de alta calidad, proporcionada “ad libitum”.
Para las infestaciones se utilizan larvas de
garrapatas Boophilus susceptibles a los acaricidas a probar. Su edad debe ser
de entre 15 a
30 días de eclosionadas.
b) Alojamiento. Los animales sujetos a
experimentación son colocados en compartimientos específicos denominados
infestaderos, donde es posible realizar los procedimientos de que consiste la
prueba, con un mínimo de riesgos para los operarios y que a la vez permite al
animal echarse o estar de pie. Los bovinos deben permanecer en estas
condiciones durante toda la prueba.
c) Infestaciones. Una vez que se cuenta con
el número adecuado de animales se inicia el programa de infestaciones que
consiste en colocar sobre el dorso y lomo de los animales, la cantidad de
larvas previamente calculada, de acuerdo con el modelo de la prueba
seleccionada. Cada tercer día se colocan 500 mg de larvas, que equivalen a
10,000, realizándose de 9
a 10 infestaciones, dependiendo de la cepa utilizada; el
tratamiento se aplicará 2 días después de la última.
Este sistema de infestación permite tener garrapatas
repletas unos 6 a
8 días antes de aplicar el producto, que son necesarias como controles en los
grupos testigo y tratado, así como para el cálculo de los porcentajes de
efectividad diario, por fase y global. De estas garrapatas se toman alícuotas
representativas de 30 especímenes al día por bovino, para mantenerlas en
condiciones óptimas de temperatura y humedad, con objeto de que completen la
fase reproductiva.
d) Tratamiento. Con la finalidad de evitar
diferencias significativas en cuanto a las condiciones y número de garrapatas
por lote de trabajo, los bovinos sujetos a prueba se reparten de acuerdo a la
media de garrapatas obtenidas en el periodo pre tratamiento, de tal forma que
sean lo más homogéneo posible.
La aplicación del producto químico se realiza de
acuerdo a las condiciones y recomendaciones expresadas por el laboratorio
productor, tanto en la posología o concentración, como en la vía de aplicación.
El tratamiento se da al grupo de animales marcado como tratados, al segundo día
de la última infestación programada.
e) Seguimiento. Después de la aplicación
del producto a evaluar, durante 25 días como mínimo se realizarán
observaciones, conteos y recolectas diarias de los bovinos; o bien, hasta que
se dejen de obtener garrapatas repletas en todos los animales. Todos los
especímenes producidos por el lote tratado, así como una alícuota significativa
del testigo, se mantendrán en condiciones óptimas de temperatura y humedad para
permitir que continúen su fase reproductiva.
Los datos derivados de las observaciones y recolectas
como: condiciones generales de salud de los bovinos; número y peso de
garrapatas obtenidas; peso de la ovoposición y porcentaje de eclosión por grupo
de especímenes por día por animal, serán registrados en formas específicas para
control adecuado de la información.
Los datos obtenidos en los seguimientos de pre y
pos-tratamiento en los grupos testigo y tratado serán utilizados para realizar
comparaciones en los parámetros biológicos descritos en el punto 6.II.1 inciso
f).
6.2.3 Prueba de establo para la evaluación de
productos de aplicación tópica denominados Pour-on. Mediante este tipo de
ensayo, el ixodicida es desafiado sobre cantidades significativas de garrapatas
en sus diferentes fases de desarrollo parásita como larvas, ninfas y adultos;
aplicándose el tratamiento tal como lo sugiere el laboratorio productor,
simulando condiciones naturales. Los indicadores biológicos de actividad a
determinar son:
- Efecto diario, global y por fases de
desarrollo, sobre el número de garrapatas que alcancen la repleción pese a la
aplicación del producto.
- Efecto sobre la ovoposición diaria, global y
por fases en garrapatas hembras repletas.
- Efecto sobre el potencial reproductivo
diario, por fases y global en garrapatas hembras repletas.
- Variantes en el peso diario en garrapatas
hembras repletas pos tratamiento.
Esta prueba deberá realizarse bajo el
siguiente procedimiento:
a) Selección del material biológico. Se utilizarán
6 bovinos de razas europeas con un peso de 200-300 kg, los cuales
serán mantenidos durante la ejecución de la prueba en infestaderos especiales
con agua y alimento de alta calidad, proporcionada “ad libitum”.
Las garrapatas que se utilizarán para las
infestaciones serán larvas de garrapatas Rhipicephalus (Boophilus) microplus
resistente a ixodicidas organofosforados y/o piretroides, con una edad
aproximada de 15 a
30 días de eclosionadas.
b) Procedimiento de infestaciones. El
procedimiento de infestación consiste en colocar sobre el lomo y dorso de cada
animal, la cantidad de 150 mg de larvas que equivalen a 3000 aproximadamente,
cada dos, días hasta completar un total de once infestaciones. Este sistema
permite obtener garrapatas hembras repletas entre cuatro y seis días previos al
tratamiento, las cuales son necesarias como controles en el grupo testigo y
tratado, para hacer comparaciones válidas en ambos y estimando los parámetros
biológicos establecidos con anterioridad.
c) Seguimiento pre tratamiento. Una
vez detectada la presencia de garrapatas hembras repletas, se inicia el
seguimiento que comprende el conteo y colecta en todos los animales de
experimentación, cuyo procedimiento continuará de igual forma hasta el final de
la prueba. El número de especímenes por conteo será registrado en las formas
respectivas para este tipo de ensayo.
Dada la característica particular de aplicación y para
determinar los indicadores de actividad propuestos, las observaciones, conteos
y colectas, así como el seguimiento pos tratamiento, se llevará a cabo tomando
en cuenta tres zonas corporales del bovino, de acuerdo al siguiente esquema:
Zona 1 Lomo y flancos
Zona 2 Cabeza, cuello y pecho
Zona 3 Entrepierna y vientre
d) Tratamiento. Con el objeto de evitar
variaciones significativas en cuanto a las condiciones y número de garrapatas
por lote de trabajo, los bovinos serán agrupados de acuerdo al promedio general
de especímenes registrados en el periodo de pre tratamiento, de tal forma que
sean lo más homogéneo posible. Tres días posteriores a la última infestación,
los animales serán pesados para determinar la dosis de producto para cada uno.
La aplicación del producto se llevará a cabo en la línea media del cuerpo,
desde la cruz hasta la región caudal, de acuerdo a la posología propuesta por
el laboratorio.
e) Seguimiento pos tratamiento. Posterior a
la aplicación del producto, se realizarán observaciones, conteos y colectas
diariamente, hasta que ya no se obtengan hembras repletas en todos los animales
y se indicará la procedencia de los especímenes colectados, que serán
registrados según la región corporal donde se localicen. Las hembras repletas,
una vez pesadas, se incubarán a 27°C + 1 y 80% H.R., para la
continuación de su ciclo vital.
Con el objeto de detectar el efecto sobre la
ovoposición, a los 14 días pos incubación, los huevos serán pesados y
mantenidos en las condiciones anteriormente descritas, por 21 días, para
calcular los porcentajes de eclosión respectivos. Ambos parámetros son útiles
para calcular finalmente el efecto sobre el potencial reproductivo de los
especímenes sujetos a tratamiento comparados con los controles.
f) Procesamiento de datos. Con la
información obtenida durante el ensayo se calcularán los parámetros biológicos
propuestos con las mismas ecuaciones del punto 6.II.1. Inciso f).
6.3 Prueba de campo para la evaluación de
productos de aspersión con garrapata Boophilus spp. Estas pruebas están
diseñadas con la idea de proporcionar un punto de vista objetivo sobre la
efectividad de los productos cuando son aplicados en ganado naturalmente
infestado y bajo condiciones de uso normales en el campo.
El objetivo de esta metodología es el de encontrar la
concentración o dosis mínima que alcanza una efectividad igual o superior al
98%, para que de esta manera se pueda calcular el factor de garantía que el
producto dado ofrece cuando se aplica siguiendo las instrucciones de uso. Esta
prueba se realizará bajo el siguiente procedimiento:
a) Selección de material biológico.
Animales de experimentación: En estos ensayos se requiere utilizar bovinos
infestados naturalmente, con un mínimo de 40 garrapatas por lado, en proceso de
repleción final. La edad o sexo de los animales no representa, en este caso,
ninguna limitación; sin embargo, es recomendable realizar las pruebas con
ganado europeo de manejo para evitar trabajo excesivo en la manipulación de
animales y conteo de especímenes.
Garrapatas: Boophilus spp.
b) Procedimiento experimental. Los lotes
de trabajo serán determinados de acuerdo con las condiciones especificadas de aplicación
del producto a evaluar. En el caso de ixodicidas convencionales, se realizarán
en la misma explotación, tratamientos por aspersión, por lo que se deberán
seleccionar predios que cuenten con las instalaciones adecuadas y un mínimo de
50 animales infestados, repartidos como a continuación se indica:
30 para tratamiento por aspersión.
De los 30 bovinos seleccionados para la prueba de
aspersión, deberán repartirse a su vez, en lotes de 5 animales cada uno,
siguiendo el procedimiento de mantener una cantidad uniforme en todos. Uno de
estos lotes será retenido como testigo y los otros cinco se utilizarán para ser
tratados con cada uno a las cinco concentraciones diferentes del producto a
evaluar. Para la identificación de los animales, habrá que marcarlos con crayón
para piel en la región pélvica, por ambos lados, y siguiendo una numeración
progresiva.
Para ambos tipos de pruebas, los grupos testigos
deberán colocarse en un potrero diferente a aquel destinado a los bovinos en
experimentación, sobre todo en los casos que se tenga conocimiento acerca de
propiedades volátiles de los productos, como en el caso de ciertos piretroides
que puedan interferir en el curso de la evaluación.
Si el producto a probar requiere de un método de
aplicación diferente, se seguirán criterios similares en cuanto a su posología
para los dos grupos de trabajo señalados.
c) Conteos pre tratamiento. Con el objeto
de determinar el número promedio de garrapatas Boophilus spp. En proceso de
repleción final por animal previo al tratamiento, se realizarán al menos dos
conteos por animal, un día antes y el día de la aplicación del producto. Sólo
serán incluidas las hembras con un tamaño de 4.5 a 8 mm de longitud, que
se encuentren localizadas en cualquiera de los dos lados en que pueda dividirse
un animal, izquierdo o derecho, incluyendo además la cola desde los pliegues
anales. Los conteos sucesivos deben realizarse en el mismo lado en que se
iniciaron, haciéndolo general a todos los animales seleccionados para la
prueba.
d) Tratamiento. En todos los casos,
independientemente del tipo de producto y su forma de aplicación, se considera
indispensable la realización de tratamientos con cinco dosis o concentraciones
progresivamente más bajas a la recomendada por el laboratorio, incluyendo ésta
como la más elevada, para ser aplicada a lote de cinco animales infestados
naturalmente en cada caso. Asimismo, en otro grupo de 25 animales se aplicará
tratamiento de acuerdo a las recomendaciones y sugerencias de aplicación del
laboratorio productor. Para ambos casos deberá contarse con lotes testigos que
se encuentren en las mismas condiciones de parasitosis que los tratados.
e) Conteos pos tratamiento. Con el fin de
evaluar el efecto de los tratamientos aplicados, se realizarán conteos diarios durante
los 7 días posteriores. Todas las hembras repletas que se encuentren durante
estas prácticas deberán ser recolectadas para llevar a cabo el seguimiento “in
vitro”. Si esto es posible, las observaciones sobre los animales incluidos en
la prueba serán continuadas hasta el día 25 cada 48 horas.
f) Seguimiento clínico. Tomando en cuenta
los riesgos que los tratamientos pueden implicar para los animales sometidos a
la prueba, se realizarán observaciones clínicas para detectar posibles
consecuencias tóxicas en el periodo crítico después del tratamiento; para lo
cual será necesario contar con los antídotos que permitan contrarrestar los
efectos adversos.
g) Análisis de resultados. Todos los datos
derivados de la ejecución de la metodología expuesta serán anotados en hojas
especiales de registro, para facilitar su procesamiento estadístico. Cuando el
número de garrapatas presentes en los animales y las condiciones de la prueba
lo permitan, se aplicará la forma de evaluación descrita para la prueba de
establo; en caso contrario se utilizará la fórmula basada en la comparación del
número de garrapatas presentes en los lotes tratados y testigo, antes y después
del tratamiento.
6.4. Prueba de campo para la evaluación de
productos de aplicación tópica Pour-on. El objetivo de la
prueba es corroborar los resultados obtenidos en los ensayos de establo y
determinar el comportamiento del producto bajo condiciones de campo.
A través de la prueba se busca determinar el efecto
diario y global sobre la repleción de las hembras; así como determinar en
garrapatas hembras repletas los efectos sobre la ovoposición y el potencial
reproductivo diario y global.
Este bioensayo, deberá realizarse bajo el siguiente
procedimiento:
a) Selección del material biológico.
Los bovinos se elegirán de un rancho que reúna las
siguientes características:
- Contar con un número de animales suficientes
para seleccionar 30 con un mínimo de 40 garrapatas por lado en proceso de
repleción. La edad o sexo de los animales no representa en este caso ninguna
limitación.
- Posibilidad de separar físicamente el grupo
tratado del control.
- Facilidades de manejo del ganado dentro del
rancho, para realizar las observaciones durante el tiempo de la prueba.
Garrapatas: Boophilus spp. de campo.
b) Procedimiento experimental.
Se formarán dos grupos de animales, el primero con 10
bovinos no recibirá ningún tratamiento y será utilizado como control; los 20
restantes se tratarán con el producto a evaluar de acuerdo a las
recomendaciones técnicas propuestas para su uso en campo.
Las observaciones pos tratamiento se llevarán a cabo
los días 1, 3, 5, 7, 14 y 21 posteriores al tratamiento, con la finalidad de
determinar el tiempo de protección a la re infestación.
6.5 Prueba de establo para evaluación de garrapaticidas
de aplicación sistémica mediante prueba de cámaras. Mediante esta prueba,
se pretende establecer los porcentajes de efectividad de los garrapaticidas
administrados por vía parenteral. Los parámetros a valorar son los mismos que
se determinaron en las pruebas de inmersión, aspersión o tópicos, consistentes
en:
- El porcentaje de supervivencia y efectividad
diaria, por fase parásita y global sobre el total de garrapatas hembras que
alcancen la repleción pese al tratamiento.
- El efecto sobre la ovoposición diaria por
fase parásita y global en garrapatas hembras repletas.
- El porcentaje de control diario, por fase y
global sobre el potencial reproductivo en garrapatas hembras repletas.
Esta
prueba deberá realizarse bajo el siguiente procedimiento:
a) Selección del material biológico. Se
utilizarán seis bovinos de raza europea con un peso aproximado de 300 kg, que serán
alojados en infestaderos individuales para facilitar el manejo, los conteos y
las observaciones diarias durante la fase experimental.
En los costados de cada animal se seleccionarán 2
áreas de infestación, en donde se procederá a afeitar una franja de 5 cm. de ancho,
obteniéndose una zona central con pelo, de un diámetro aproximado de 88 cm2. En
cada uno de estos sitios se colocará una cámara de tela de 35 x 25 cm a manera de
manga, fijándose ésta a la piel del animal con pegamento de contacto. El
extremo libre quedará cerrado por medio de un hilo elástico para facilitar las
observaciones y colectas de especímenes, así como para evitar la fuga de los
mismos.
Garrapatas: Rhipicephalus (Boophilus)
microplus cepa susceptible a ixodicidas organofosforados y piretroides
sintéticos.
b) Procedimiento experimental. Se
realizarán 10 infestaciones en cada cámara los días lunes, miércoles y viernes,
por un periodo de 30 días entre la primera y última infestación; colocándose 15
mg de larvas equivalentes a 300 especímenes, con una edad de 15 días de
eclosionadas.
c) Conteo pre tratamiento. Una vez
detectada la presencia de garrapatas hembras repletas en la cámara, se inicia
el seguimiento diario que consiste en recolectas y conteos de todos los
especímenes recién desprendidos, siguiendo este procedimiento de igual forma
hasta la culminación de la fase experimental en los infestaderos. El número de
especímenes por conteo será registrado en las formas específicas. Las hembras
repletas serán pesadas e incubadas en condiciones óptimas de temperatura y
humedad relativa.
d) Tratamiento. A tres días de iniciada la
recolecta de especímenes, se procederá a aplicar el tratamiento en 4 bovinos y
los dos restantes serán controles, la aplicación del producto será por
inyección subcutánea en la parte frontal o posterior de la escápula a la dosis
recomendada por el laboratorio solicitante de la evaluación.
e) Conteo pos tratamiento Los especímenes
recolectados en cada una de las cámaras durante esta fase de trabajo, serán
clasificados y alojados en cajas de petri desechables de 100 x 15 mm. Las garrapatas
hembras repletas se pesarán e incubarán a 27°C y 80 % de humedad relativa. A los
14 días pos incubación, los huevos serán retirados y pesados, anotándose todos
los datos resultantes en las hojas de registro respectivas.
Los huevos se alojarán en viales de vidrio e
incubados en las condiciones de microambiente descritas con anterioridad, por
25 días, para posteriormente calcular los porcentajes de eclosión. Tanto la
ovoposición, como la eclosión, son parámetros biológicos necesarios para que
finalmente, se pueda calcular el efecto total sobre el potencial reproductivo
de los especímenes sujetos a tratamiento comparados con los controles.
f) Análisis de resultados. Con la
información obtenida durante el ensayo, se calcularán los parámetros biológicos
propuestos con las mismas ecuaciones matemáticas del punto 6.2.1. Inciso f).
6.6 Prueba de campo para evaluación de
garrapaticidas de aplicación sistémica. El procedimiento en su totalidad es
similar al de las pruebas de campo para la evaluación de productos de
aplicación tópica, variando únicamente en lo relativo a la forma de aplicación
del producto.
6.7 Prueba de campo para evaluación de
garrapaticidas de aplicación mediante bolos de liberación lenta. Tiene como
finalidad determinar la efectividad de un ixodicida intrarruminal de liberación
lenta en ganado bovino naturalmente infestado, utilizando como parámetros de
evaluación, los mismos que se usan en las otras pruebas de campo consideradas
en esta Norma.
Esta prueba se realizará bajo el siguiente
procedimiento:
a) Selección del material biológico.
Se seleccionarán 30 bovinos de la raza Pardo Suizo o similar, con un peso
aproximado de 200 a
250 kg.
Los animales que reciban el tratamiento no podrán ser utilizados para consumo
humano por 210 días, a partir del día de que el bolo fue administrado.
Garrapatas: Boophilus spp. de campo.
b) Procedimiento experimental.
Debido a las características de este trabajo y a la limitada oportunidad de
realizar observaciones frecuentes sobre los animales seleccionados, se
utilizará un lote experimental con un mínimo de 20 bovinos y un grupo control
con 5 o 10 animales. Como el tipo de tratamiento no implica alguna posible vía
de contaminación de los animales testigos por parte de los tratados, no será
necesaria la separación de los grupos de trabajo. La prueba tendrá una duración
de 5 meses a partir del inicio de ensayo.
c) Conteos
pre tratamiento. Antes de la administración de los bolos intrarruminales
con ivermectina y placebo, se deberán realizar dos conteos de garrapatas de
ambos géneros, para lograr una mayor homogeneidad en los lotes experimentales y
tener una referencia en los cálculos de efectividad respectivos.
En el caso de garrapatas Boophilus spp. sólo serán
sujetos de registro aquellos especímenes en proceso de repleción con un tamaño
entre 0.4 a
0.8 cm
de largo y que se presenten en el lado derecho del animal, incluyendo cola y
muslo.
d) Tratamiento. La administración de los
bolos intrarruminales se realizará a uno de los dos grupos dejando al otro como
testigo, haciendo la aplicación se realizará de acuerdo a las instrucciones que
al respecto proporcione el laboratorio productor, una vez que finalice el
segundo conteo.
e) Conteos pos tratamiento. Siguiendo los
criterios señalados para el conteo de especímenes, se realizarán visitas de
inspección los días 7, 14, 21, 42, 63, 84, 105, 120 y 135 para lograr un total
de 9 observaciones, en un lapso de 4.5 meses. Siempre que sea posible, se
realizarán recolectas de especímenes para su seguimiento en el laboratorio
aprobado, para determinar capacidad de supervivencia y potencial reproductivo
en los adultos.
f) Análisis estadístico. Los
resultados obtenidos serán sujetos a un análisis estadístico para determinar la
efectividad del tratamiento en forma mensual y por el periodo total, aplicando
las ecuaciones establecidas para cada uno los parámetros biológicos a
consideración, como son: sobrevivencia, capacidad de muda, efectos sobre
ovoposición y potencial reproductivo.
7. Bibliografía Álvarez, V., R. Bonilla
& I. Chacón. 1999. Determinación de la resistencia de la garrapata
Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) a organofosforados y
piretroides en Costa Rica. Rev. Cien. Vet. 22 (2): 41- 60.
Anónimo. 1980. Informe Final Proyecto Estudio
de Factibilidad para el Control de la Garrapata, p. 1-118. San José. Costa
Rica.
Anónimo. 2001. Cálculo de parámetros
biológicos de la prueba biológica y bioensayos con concentraciones múltiples
(Probit), p. 40. In
M. Santamaría & N. Soberanes (eds.). Curso – Taller sobre Diagnóstico de
Resistencia a Ixodicidas en Garrapatas Boophilus microplus. Jiutepec, Morelos,
México.